RNA提取浓度不高或质量不佳原因及解决办法:1、RNA降解:可能是提取样本本身降解,苏州正规RNA提取试剂销售厂家,或者是在提取过程中导致的降级;应当尽可能使用新鲜样本进行RNA提取,采集的样本应当及时置于液氮或者-80℃冰箱冻存,并减少反复冻融。在RNA提取过程中应当使用RNase/DNasefree的吸头,苏州正规RNA提取试剂销售厂家、离心管及其他材料,提取过程尽可能的快,提取后的RNA应置于冰盒上并及时放于-80冻存。如提取后的RNA需要进行凝胶电泳检测,则应提取好后立刻进行电泳,电泳缓冲液应更换新配制的。2、盐及有机溶剂残留:提取试剂中含有酚及胍盐,洗涤液中含有乙醇,在提取过程中裂解液吸弃不彻底,苏州正规RNA提取试剂销售厂家,洗液没有充分晾干导致的,残留的盐及有机溶剂对后续的逆转录和PCR均存在不同程度的压制作用,因此在提取过程中应充分去除组织裂解液,洗涤时应充分,使管壁四周均能被洗涤到,另外管子空离和吹风是必须的步骤,会进一步降低有机物残留。能迅速破碎细胞,压制细胞释放出的核酸酶。苏州正规RNA提取试剂销售厂家
植物RNA快速提取试剂盒:1.固体组织破碎设备。可用下列装置之一:1)玻璃匀浆器。泡酸清洁,用高压灭菌蒸馏水洗涤数次。2)研钵。适用于液氮冻存组织的研磨,清洗方法同玻璃匀浆器。3)高速机械匀浆器(Polytron,Tekmar或类似产品),打开开关,在蒸馏水中清洗分散器头数次。2.高压蒸汽30分钟消毒一次性吸头离心管。RNA沉淀溶解之后,应严格使用高压消毒的一次性用品。然而PlantRNAtrip能在RNA酶污染环境下工作,在裂解步骤可使用未高压但洁净的一次性吸头和离心管,但光推荐在紧急情况下这样做。3.普通双蒸水,高压消毒20分钟。用于冲洗器皿,配制琼脂糖凝胶和电泳用缓冲液。DEPC处理的双蒸水。加DEPC到水中至终浓度为0.01%v/v,室温过夜,高压消毒30分钟。用于溶解RNA,配制TE缓冲液和75%乙醇。4.湿冰。在冰上进行操作有助于减少RNA降解。5.其它用品。电泳槽,双蒸水冲洗。离心机和加样器,无需处理。6.戴手套。注意某些实验如提取质粒DNA如使用极大量RNA酶,为防污染,须较全仔细清洗实验器具和实验区域。苏州正规RNA提取试剂推荐厂家在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。
RNA提取试剂的选择:选择合适的提取试剂是较重要的一步。好的提取试剂在确保成功的同时,操作方便且经济实用。对于动物组织、简单的植物材料、各种微生物、培养细胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有诸多的成功案例。随着2013年7月柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,进一步丰富了TakaraRNA提取的产品线。该产品采用了独特的细胞裂解系统,无需苯酚氯仿抽提等步骤,简单快捷。组织或细胞裂解后,提取操作光需20分钟便可完成。
目前,主流的RNA提取方法有Trizol法、离心柱法和磁珠法。其中,Trizol法与离心柱法相比,提取效果相当,但因其对操作者带来的毒性,现在越来越被弃用。磁珠法可以针对大批量样本处理,适合机器自动化提取,但是提取核酸纯度低,提取得率低,且使用成本较高。对于拭子RNA含量较低的样本或比较珍贵的样本或样本总数不是很多的实验室,选择的拭子RNA提取方法应是离心柱法。近来,随着基因诊断技术的发展,从口腔拭子、泌尿生殖道拭子、痰液等样本中进行RNA提取的试剂盒的应用价值越来越大,如tumour早期诊断、遗传病检测和病原体传染核酸检测等。拭子RNA提取效果在很大程度上取决于采样质量、试剂盒性能等,特别是试剂盒的性能较大影响了拭子核酸的基因检测和各种研究的开展。再采集样本之后马上加入 DNA/RNA Shield,可以快速降解掉 RNase 等蛋白物质。
RNA提取:预备工作RNA酶(Rnase)是导致RNA降解较主要的物质。此酶非常稳定,在一些极端的条件下只可暂时失活,但限制因素去除后又迅速恢复活性。常规高温高压灭菌方法和蛋白压制剂不能使所有的Rnase完全失活。1.它普遍存在于人的皮肤上,因此制备RNA时必须戴手套。2.RNase的又一污染源是取液器。根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用以DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部,可基本达到要求。3.塑料制品、玻璃和金属物品的处理。在提取时,实验人员需要佩戴口罩和手套等各种防护装备,以防实验室污染。苏州RNA提取试剂厂家直销
即用型RNA,可在绝大多数下游应用。苏州正规RNA提取试剂销售厂家
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