准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液 的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙 烯管，例如 Falcon  5 mL /14 mL 离心管。转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿，不同分子量PEI转染试剂蛋白产量。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，不同分子量PEI转染试剂蛋白产量，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物，不同分子量PEI转染试剂蛋白产量。转染3h后，添加?体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果：在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后快7h即可检测到转入基因的表达。请自行确定检测时间。PEI转染试剂是一种阳离子聚合物转染试剂。不同分子量PEI转染试剂蛋白产量

方法：1．细胞分盘：通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90％）。根据细胞贴壁情况于含5％CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2mL预热的无血清培养基。2.制备PEI-DNA混合物：以60mm组织培养皿用420μL反应总体积为例。准备两支1.5mL离心管，一管将质粒DNA（总量2-8μg为佳）加入240μLHBS中，混匀。另一管中则用HBS将100μM的PEI储存液稀释成10μM，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混匀后室温静置20-30min。将这420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中，轻轻摇动平皿混匀，置于含5％～7％CO2的37℃温箱孵育。注：每次用100μM的PEI储存液前都需要先将其充分混匀，保证所取的浓度一致。3.培养6-10h后更换为37℃预热的含有血清的培养基，继续培养，16h左右可以观测到报告基因的表达。PolysciencesPEI转染试剂配置方法美国Polysciences提供化学PEI转染试剂。

线性PEI转染试剂是一种阳离子聚合物，分子量25000，它能与核酸形成复合物，并使该复合物进入哺乳动物细胞。线性PEI转染试剂广适用于常见细胞系，如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。该试剂即使在有血清存在的情况下，它仍然能的将核酸导入细胞。78bio公司提供的线性PEI转染试剂具有如下优点：优越的转染效率,重组蛋白的高表达水平,与含血清的培养基相兼容,低细胞毒性,易于操作?质量控制每批次线性PEI转染试剂均经过转染测试。将eGFP表达质粒（GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01）用EndoFectinTM-Plus转染试剂转入亚融合状态的HEK-293细胞，转染16h后，超过95%的细胞表达eGFP。

稳定转染方法：1.接种细胞：转染前，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL离心管。PEI转染试剂如何溶解和配置？

稳定转染方法1.接种细胞：转染前，用胰酶消化细胞并计数。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，总体积如表1所示，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL离心管。PEI转染试剂的残留检测方法怎么开发？In vivoPEI转染试剂怎么样

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