1977年，WalterGilbert和FrederickSanger发明了***台测序仪，并应用其测定了***个基因组序列，噬菌体X174，全长5375个碱基。由此开始，人类获得了探索生命遗传本质的能力，生命科学的研究进入了基因组学的时代，到至今为止的四十年时间内，测序技术已取得了相当大的发展，从***代发展到了第三代测序技术。Sanger所发明的测序方法被称为***代测序技术，该技术直到现在依然被***使用，但是其一次只能获得一条长度在700～1000个碱基的序列，无法满足现代科学发展对生物基因序列获取的迫切需求。高通量测序(High-ThroughputSequencing，上海Claudin18.2迈杰转化医学NGS平台服务至上，上海Claudin18.2迈杰转化医学NGS平台服务至上,HTS)是对传统Sanger测序的**性变革，其解决了一代测序一次只能测定一条序列的限制，一次运行即可同时得到几十万到几百万条核酸分子的序列，因此也被称为新一代测序(NextGenerationSequencing,NGS)或第二代测序。第二代测序技术虽然测序的通量**增加，但是其获得单条序列长度很短，想要得到准确的基因序列信息依赖于较高的测序覆盖度和准确的序列拼接技术，因此**终得到的结果中会存在一定的错误信息。因此，上海Claudin18.2迈杰转化医学NGS平台服务至上，科研人员又发明了第三代测序技术也称为单分子测序技术，该技术在保证测序通量的基础上，对单条长序列进行从头测序。 迈杰转化医学为生物标志物研究和伴随诊断开发提供科学支持，多层面助力新药研发临床试验。上海Claudin18.2迈杰转化医学NGS平台服务至上

    ABI/SOLiDSOLiD技术是由连接酶测序法发展而来，LerroyHood在上世纪80年代中期利用连接酶法设计了***台自动荧光测序仪。SOLiD以四色荧光标记寡核苷酸的连续连接合成为基础，取代了传统的聚合酶连接反应，可对单拷贝DN**段进行大规模扩增和高通量并行测序。Illumina/SolexaIllumina公司的第二代测序仪**早由Solexa公司研发，其同样为边合成边测序，该技术在测序的过程中，加入改造过的DNA聚合酶和带有4种荧光标记的dNTP，因为dNTP的3'羟基末端带有可化学切割的部分，它只容许每个循环掺入单个碱基，此时，用激光扫描反应板表面，根据dNTP所带的荧光读取每条模板序列每一轮反应所聚合上去的核苷酸种类，经过“合成-清洗-拍照”的循环过程，**终得到目的片段的碱基排列顺序。技术原理Roche/454Roche/454技术原理，并在片段两端加上不同的接头，或将待测DNA变性后用杂交引物进行PCR扩增，连接载体，构建单链DNA文库。，将包含PCR所有反应成分的水溶液注入高速旋转的矿物油表面，形成被矿物油包裹的无数个小水滴，每一个小水滴即为一个**的PCR反应空间，理想状态下，每一个小水滴只包含一个DNA模板和一个磁珠，磁珠表面含有与接头互补的DNA序列，经过PCR扩增后。 黑龙江专注迈杰转化医学NGS平台共同合作迈杰转化医学可以提供覆盖肺ai、肠ai、肝ai、胃ai、乳腺ai、前列腺ai等多种实体瘤的上百项检测项目。

    图7IHC检测FGF-19过表达（左：正常胆囊组织(阳性对照)；右：肝细胞*组织(弱阳性)）➤➤方案4：RNAscope法评估FGFR1/2/3/4的mRNA表达水平此外，RNAscope在细胞原位评估mRNAs水平方面，能够更直接精细地确定基因的扩增状况。迈杰转化医学在数字病理平台上已经建立了检测FGFR过表达的RNAscope的方法，可以原位检测FGFR1-4mRNAs表达水平，为FGFR抑制剂的生物标志物检测和研究提供了更多可能（图8）。图8RNAscope检测肺*总FGFR1/2/3/4的mRNA表达水平除以上示范，迈杰转化医学还可提供其他类型（如PD/PK生物标志物）解决方案并已有相关经验（表7）。References:[1]HelstenT,ElkinS,ArthurE,[J].ClinicalCancerResearchAnOfficialJournaloftheAmericanAssociationforCancerResearch,2016,22(1):259.[2]TurnerN,.[J].NatureReviewsCancer,2010,10(2):116-129.[3]PetersKG,MarieJ,WilsonE,[J].Nature,1992,358(6388):678-681.[4]KangS,ElfS,DongS,.[J].MolecularandCellularBiology,2009,29(8):2105-2117.[5]BabinaIS,[J].NatureReviewsCancer,2017,17(5):318.[6]NataliaPorębska,Marta,.[J].JournalofClinicalMedicine。

    基于以上研究，迈杰转化医学可针对患者分层及各类研究指标提供FGFR抑制剂***中生物标志物研究的整体解决方案，包含：HumanComprehensivePanelMed1CDx；定制的panFGFxpanel；QIAGENtherascreen®FGFRRGQRT-PCRKit；RNAscope检测FGFR1/2/3/4mRNA表达；FISH（FGF19扩增）；IHC（FGF19表达）等（图4）。图4FGFR抑制剂相关的生物标志物整体解决方案➤➤方案1：Med1CDxNGSpanel(601基因)迈杰转化医学的Med1CDx综合panel包含原*基因、遗传性驱动基因、细胞周期基因和免疫/炎症相关基因等601个基因，可用于对TMB、MMR、MSI、免疫检查点分子、**新生抗原和HLA分型等***的分析。对于FGFR抑制剂研究，该panel除了能够检测FGFR基因的SNV/INDEL、基因重排和扩增等异常，也可以评估已知和探索新的耐药变异（图5）。图5Med1CDx基因分布➤➤方案2：定制panelpanFGFx（40基因）值得关注的是，迈杰转化医学针对FGFR抑制剂的研究研发了“小而精”的panFGFxpanel：FGFR1-4探针覆盖基因全部外显子，包括UTR区，覆盖**全，同时检测已知与未知SNV/InDel；针对融合检测，加入了已知融合伙伴的相关探针，提高已知融合检出率；如有新融合发现需求，可提供涵盖全部内含子区版本；针对拷贝数扩增检测。 迈杰拥有StarLIMS实验室信息化管理系统，中心实验室获得了中国CNAS ISO 17025实验室认可、美国CAP认证。

    ，需将磁珠固定在特制的PTP平板上。这种平板上含有许多直径约为44μm的小孔，每个小孔*能容纳一个磁珠，通过这种方法来固定每个磁珠的位置。启动测序反应后，每次向PTP平板中加入一种dNTP，如果能与待测序列配对，则会在碱基连接在模板上之后释放焦磷酸，焦磷酸通过ATP硫酸化学酶***荧光素酶产生荧光，通过PTP板另一侧的CCD照相机记录荧光，从而确定目的模板的核酸序列。ABI/SOLiDABI/SOLiD技术原理SOLiD测序技术与454技术的原理比较类似，同样是采用油包水的方式进行EmulsionPCR。不同之处在于SOLiD形成的小水滴要比454系统小得多，只有1μm大小，并且在PCR扩增的同时对扩增产物的3'端进行修饰，为下一步的测序做准备。在PCR完成之后，SOLiD技术进行测序时，其反应底物不是dNTP也不是ddNTP，而含有8个碱基的单链荧光探针混合物，在测序时，这些探针按照碱基互补规则与单链DNA模板链配对，不同的探针的5'末端分别标记不同颜色的荧光染料，每两个碱基确定一个荧光信号，相当于一次能决定两个碱基，因此，这种测序方法也被称为两碱基测序法。 迈杰转化医学致力于解决创新药物的研发痛点及患者的用药痛点，助力精z准医疗！福建抗体全迈杰转化医学NGS平台郑重承诺

迈杰转化医学具体包括全套的Leica组织样本制备系统，Ventana、Leica、DAKO等全自动免疫组化仪。上海Claudin18.2迈杰转化医学NGS平台服务至上

    其中扩增dys19、dys388、dys389i、dys389ii、dys392、dys449、dys459a/b、dys485、dys504、dys531、dys626和dys627的引物不同。表52、取标准品2800m，用超纯水稀释，获得浓度为1ng/μl的标准品2800m水溶液。3、以标准品2800m水溶液为模板，分别采用引物混合物1和引物混合物2进行pcr扩增，得到pcr扩增产物。每条引物在反应体系的浓度均为μm。4、同实施例2步骤一中3。5、同实施例2步骤一中4。6、同实施例2步骤一中5。检测结果见表6。结果表明，实施例1制备的试剂盒中的引物被替换后，部分基因座被抑制且引物混合物1和引物混合物2的抑制情况不同。表6注：n与其后数字表示一段碱基序列，其后数字表示序列的碱基数目；“-”表示未获得基因型。上述结果表明，实施例1制备的试剂盒中引物具有不可替换性，本发明的发明人经过大量实验摸索，才获得了试剂盒中的引物组合及引物浓度。上海Claudin18.2迈杰转化医学NGS平台服务至上

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