紫外可见分光光度计光学系统的重要性,光学类分析仪器肯定有光电转换系统,只是光电转换系统的类型不同、结构不同而已。例如,有的用光电管,有的用光电倍增管,有的用硅光电池,有的用二极管阵列或CCD,有些仪器采用。因为,光学类的分析都必须要将光信号转换成电信号后,才能进行电学处理、计算,国内紫外可见分光光度计、输出打印,所以,任何光学类分析仪器都必须要有相应的光电转换系统。而且这个系统中的光电元件本身的质量必须稳定可靠,必须有很高的光电转换效率(灵敏度),有相应的光谱响应范围,国内紫外可见分光光度计,否则不可能保证仪器正常工作。同时,国内紫外可见分光光度计,有的元件还必须加一个稳定的直流电源,组成稳定的光电系统,才能保证仪器正常工作。例如,光电管必须加一个稳定的30~90V的直流电源,光电倍增管必须加一个非常稳定的300~1000v的直流高压电源,才能保证仪器正常工作。 可见光区的测量用玻璃吸收池,紫外光区的测量须用石英吸收池。国内紫外可见分光光度计
紫外可见分光光度计虽然有好的使用效果,整个使用会非常的精确,不过在对这种设备安装时候会对安装环境有一定要求的,具体往往表现在以下这些方面:方面一:如果是在实验室环境下安装紫外可见分光光度计设备的话,不仅*对环境的温度和洁净度情况有一定要求,而且对光核磁场干扰情况也有一定要求;一般环境温度仪器要能安装在干燥房间内,保持房间温度要在5-35摄氏度左右,要能够保证的室内湿度不能超过百分之八十五,比较好的湿度要能控制在百分之四十五到百分之六十五之间,如果有条件的话可以进行配备去湿机和温度计等,当室内环境下湿度相对比较大的话还需能在设备周围放上一些干燥剂才行。方面二:在安装紫外可见分光光度计设备时候,需要去一些无强光干扰和没有磁场干扰的室内进行安装,尤其需要能够避免太阳光的直射,如果做不到这些在安装设备时候就会造成对设备的损坏情况发生,同时在使用紫外可见分光光度计设备时候也需能够远离一些**度的磁场、电场和发生高频波的电器设备,以防止电磁干扰影响准确的使用情况。方面三:在安装紫外可见分光光度计设备时候,需要避免在一些存有腐蚀性气体环境下进行,有腐蚀的气体包括有硫化氢、二氧化硫和各种酸雾等。 国内紫外可见分光光度计在分析化学中使用的许多校正曲线都是线性的,一般是通过测量一系列标准溶液来求得。
原子荧光分析法。气态自由原子吸收特征波长的辐射后,原子的外层电子从基或低能态跃迁到高能态,约经10-8S,又跃迁至基态或低能态,同时发射出与原激发长相同或不同的辐射,称为原子荧光。波长在紫外和可见光区。在与激发光源成一定角度(通常为90。)的方向测量荧光的强度,可以进行定量分析。原子吸收光谱分析法。利用待测元素气态原子对共振线的吸收进行定量测定的方法。其吸收机理是对共振线的吸收导致原子的外层电子能级跃迁,所吸收波长在紫外、可见和近红外区。紫外分光光度分析法此法是利用溶液中分子吸收紫外光而产生跃迁所记录的吸收光谱图,可进行化合物结构分析,根据比较大吸收波长强度变化可进行定量分析。可见分光光度分析法此法是利用溶液中分子吸收可见光产生跃迁所记录的吸收光谱图,可进行化合物结构分析,根据比较大吸收波长强度变化可进行定量分析。
一般来说,紫外光分光光度计分为单光束和双光束两类。顾名思义,单光束型主要是依赖单束光进行测量。一束给定波长的光通过对照物,然后再通过实际样品溶液,就能得到吸光结果。双光束型则是通过一个斩光轮(mirroredchopperwheel)将一束光分成两束,分别测量对照样品和实际样品。可以很小化光漂移(lampdrift)和减少测量时间。一些双光型光度计不利用斩光轮,而是利用一种光束分光器来代替,将一束光分成两束平行的光然后同时测量对照样品和目的样品。因为增加了测量的速度,所以双光束分光光度计在测量一些溶液随时间动态变化的研究中大有用处。分光光度计的光谱也是需要考虑的一个重要因素。实验室研究人员希望省钱购入专门仪器定量核酸、蛋白或者细菌的生长情况。例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260、280、320、595和600nm的波长下测量样品。果果需要更大的灵活性,研究者可以考虑一种更高性能的宽光谱仪器,可以程序性地进行ELISAs分析和比色分析。 光源的功能是提供足够强度的、稳定的连续光谱。
紫外可见分光光度计在有机分析中的应用分析。利用特征吸收峰法鉴别有关物质利用某些化合物在紫外区的特征吸收峰,可以判别物质。如,氯霉素分子中的硝基是由它的紫外光谱确定的。在紫外区的298nm和278nm处,氯霉素会出现芳香硝基的特征吸收峰。五元环酮和羧基酯的红外光谱特征吸收峰都在1740cm-1附近,因此,用红外光谱法,难以区分它们。但是,在紫外光谱中,只有五元环酮在210nm以上有吸收,因此,可以鉴别。(2)利用紫外光谱谱图的方法鉴别有机化合物通过对比两个有机化合物的紫外光谱图,可以鉴别它们。(3)利用π键反应减小干扰在紫外可见分光光度计的使用过程中,有时很强的吸收会引起干扰作用,如:有些稠环化合物对某些波长的吸收就很强,这时,可采用化学,c键反应去除。例如有机化合物蒽具有三个大冗键,在波长252nm处有沟吸收,它的摩尔吸光系数会对一些在此也有吸收的化合物产生干扰,可让它与丁烯二酸酐发生Diels-Alder加成反应。这个反应的结果,原来三个大π键的共轭系统就被破坏,原先很强的吸收就被减弱,干扰就会减小。 温度和湿度是影响紫外可见分光光度计性能的重要因素。直读紫外可见分光光度计比较
测定时,禁止将试剂或液体物质放在仪器的表面上,如有溶液溢出或其它原因将样品弄脏,要及时清理干净。国内紫外可见分光光度计
分光光度计的带宽(bandwidth)很大程度上依赖于单色仪的狭缝的宽度。可以投射出实验精确要求的光谱。一种严格带宽使得仪器能对复杂的混合物进行高分辨率的吸光测量。可变的单色仪的狭缝宽度能使一台分光光度计满足多种实验需要。为了测量吸光值,分光光度计制造商通常使用光电倍增管(photo-multipliertubes,PMTs)和光敏二极管。PMTs提供快速的反应时间和良好的灵敏度,并且可以在紫外光谱调节至特定的范围。但一些制造商依赖于光敏二极管的动态范围在数秒内行使所有的光谱测量。国内紫外可见分光光度计
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