微生物培养基制备:溶解灭菌后,盘子上无不溶性结晶紫、无紫色斑;与未溶解和消毒的盘子相比,盘子上有结晶紫和紫色斑点。因此正确的步骤顺序是在高压灭菌前需要进行培养基煮沸溶解。先煮沸溶解后冷却至二十五度,确定pH值;对需要高压灭菌的介质取平均值,高压灭菌后冷却至二十五度,这两种状况测量培养基pH值,固体培养基至少检测两个点,取它们的平均值。控制培养基在容器中不要超过百分之八十,避免填充过多。注意控制高压灭菌时间过长(115-116度)二十分钟即可,太原培养基制备器批发,太原培养基制备器批发,温度不超过121度,而且灭菌后的培养基在高温环境中不要长时间存放,太原培养基制备器批发。高压蒸汽灭菌一般使培养基 pH降低, 应在配制培养基时加以调节。太原培养基制备器批发
培养基配置原则:灭菌处理,要获得微生物纯培养,必须避免杂菌污染,因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言,更是要进行严格的灭菌。对培养基一般采取高压蒸汽灭菌,一般培养基用1.05kg/cm2,121.3℃条件下维持15-30min可达到灭菌目的。在高压蒸汽灭菌过程中,长时间高温会使某些不耐热物质遭到破坏,如使糖类物质形成氨基糖、焦糖,因此含糖培养基常在0.56kg/cm2,112.6℃15-30分钟进行灭菌,某些对糖类要求较高的培养基,可先将糖进行过滤除菌或间歇灭菌,再与其他已灭菌的成分混合;长时间高温还会引起磷酸盐、碳酸盐与某些阳离子(特别是钙、镁、铁离子)结合形成难溶性复合物而产生沉淀。太原培养基制备器批发组合培养基是一类按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。
培养平板培养基是被用于获得微生物纯培养的很常用的固体培养基形式,它是冷却凝固后的固体培养基在无菌培养皿中形成的培养基固体平面,常被简称为培养平板。也叫平面培养基、平皿培养基。平板培养基常用于单孢分离,测定菌丝生长速度,观察菌落的形态,拮抗实验,测定接种空间杂菌数。平板培养基制作方法如下:将培养皿洗净、干燥,使各培养皿盖方向一致,用牛皮纸包好,或放入特制铁罐内,注明皿盖的方向。高压灭菌或干燥灭菌后备用。取刚灭菌后尚未凝固的培养基置于无菌箱或超净工作台内,先左手持三角瓶,右手反转手掌用中指和无名指拨出棉塞或硅胶赛(或不翻转手掌用小指和手掌拨出棉塞) ,同时将三角瓶转换至右手,而后左手拿平皿,以大拇指和中指将皿盖打开一缝, 至瓶口刚好伸人。三角瓶口经火焰烧灼后,倾入灭菌或溶化、冷却至55~60°C的培养基约15mL(勿使瓶口靠在平皿壁上,以免沾染皿壁),迅速盖好皿盖,置于桌上轻轻旋转平皿,使培养基均匀分布于整个平皿底部,冷凝后即为平板培养基。有时凝固后的培养基表面有冷凝水,可将平皿盖打开倒置于37℃温箱,除去冷凝水,否则将影响平板分离培养效果。为防止冷凝水过多,也可将培养基冷却至45 ~ 50°C再倒平板。
血清培养基主要问题:血清含一些对细胞产生毒性的物质,如多胺氧化酶,能与来自高度繁殖细胞的多胺反应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌有毒的等都会影响细胞生长,甚至造成细胞死亡。动物个体不同,血清产地、批号不同,每批质量差异甚大,其成分不能保持一致。取材中可能带入支原体、病毒,对细胞产生潜在影响,可能导致实验失败或实验结果不可靠性。大规模生产中,血清来源越来越困难,价格昂贵,是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。调节氧化还原电位(Eh) 各种微生物对培养基的Eh要求不同。
培养基配制:配制用水,培养基的大部分是水,所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准,水的电阻应为200万欧姆,一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。培养基:培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。血清:培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。培养基根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、培养基等。太原培养基制备器批发
分装琼脂斜面培养基时,分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为洽当。太原培养基制备器批发
培养基制备基本方法:培养基成分的称取,培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱,很好一次完成,不要中断。可将配方置于傍侧,每称完一种成分即在配方上做出记号,并将所需称取的药品一次取齐,置于左侧,每种称取完毕后,即移放于右侧。完全称取完毕后,还应进行一次检查。培养基的制备记录,每次制备培养基均应有记录,包括培养基名称,配方及其来源,和各种成份的牌号。很终pH值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等,记录应复制一份,原记录保存备查,复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。太原培养基制备器批发
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