免疫胶体金技术的基本知识1、胶体金的概念氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。2、免疫金标记技术胶体金颗粒表面负电荷与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。胶体金对蛋白质有很强的吸附功能，蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面，北京胶体金快速定量读数仪在线议价，无共价键形成，标记后大分子物质活性不发生改变。3、胶体金的示踪原理金颗粒具有高电子密度的特性，北京胶体金快速定量读数仪在线议价。金标蛋白在相应的配体处大量聚集时，在显微镜下可见黑褐色颗粒或肉眼可见红色或粉红色斑点。免疫金银染色：利用金颗粒可催化银离子还原成金属银这一原理，北京胶体金快速定量读数仪在线议价，通过银颗粒的沉积，在光镜下可见抗原抗体反应的阳性部位呈现银的黑褐色。无锡天纵易骏的读数仪物美价优，不要犹豫欢迎咨询！北京胶体金快速定量读数仪在线议价

    免疫胶体金的应用1、胶体金在光镜水平、电镜水平的应用直径为3～15nm胶体金均可用作电镜水平的标记物。优点是可以通过应用不同大小的颗粒进行双重或多重标记。胶体金用于光镜水平、电镜水平的研究，主要包括：①细胞悬液或单层培养中细胞表面抗原的观察。②单层培养中细胞内抗原的检测。③组织切片中抗原的检测。2、胶体金在流式细胞仪中的应用应用胶体金标记的抗体，分析细胞表面抗原。胶体金可以明显地改变红激光散射角，区分不同的标记，能同时进行几种标记。3、凝集试验单分散的免疫金溶胶清澈透明。与相应抗原或抗体发生专一性反应后出现凝聚，溶胶颗粒增大、沉降，光散射随之发生变化，溶液的颜色发生变化。4、免疫印迹技术用聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白质分离，得到的区带转移至硝酸纤维素膜，与特异性的抗体保温后，再与胶体金标记物温育，根据膜上胶体金颗粒颜色深浅可测知样品中的特异性抗原。金免疫印迹技术有相当高的灵敏度。采用免疫金银染色法，灵敏度可低至。 山西胶体金快速检测读数仪定制分析仪内置条形码识别模块，可以支持试剂条项目自动识别功能。

    胶体金的制备1、胶体金制备的注意事项（1）玻璃容器的清洁：玻璃容器应保持清洁，用前酸洗、硅化。（2）试剂、水质：实验用水一般用双蒸水。缓冲液有足够大的缓冲容量，浓度不应过高以免金溶胶自凝。2、常用方法一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、白磷。（1）柠檬酸三钠还原法：取％氯金酸水溶液100ml加热至沸，搅动下准确加入１％柠檬酸三钠水溶液，金黄色的氯金酸水溶液在2分钟内变为紫红色，继续煮沸15分钟，冷却后以蒸馏水恢复到原体积，如此制备的金溶胶其可见光区*高吸收峰在535nm，Ａ1cm/535nm=。2）柠檬酸三钠－鞣酸混合还原剂：改变鞣酸的加入量，制得不同大小的胶体颗粒。（3）白磷还原法：制备的胶体金直径约6nm，并有很好的均匀度，但白磷和yimi均易燃易爆，一般实验室不宜采用。

蛋白质的标记：在体外诊断应用领域，通常采用抗原或抗体与免疫金结合制备免疫金结合物。采用单克隆抗体或多克隆抗体，是影响抗体标记的因素之一。虽然诊断产品中大多数抗体标记采用IgG抗体，但IgM、IgE和IgA抗体也可以成功标记上胶体金。标记时，进一步必须考虑抗体的亚型。在鼠抗IgG亚型中，例如IgG1亚型成功率高，而IgG3亚型被证实有技术难度。将抗原标记胶体金也面临技术难题。将常见的抗原标记上胶体金比较容易。但是受抗原与胶体金结合方式的影响，金标记覆盖的蛋白反应决定簇小于50%时才能高成功率制备出标记物。因此，考虑蛋白结合金的方式对标记开发人员非常重要。想要购买读数仪 ，就选无锡天纵易骏，有需要可以联系我司哦！

联接机理：研究人员普遍接受的理论为，三种特异的氨基酸残基在金颗粒与蛋白质的联接作用中发挥着重要的作用。而赖氨酸、色氨酸和半胱氨酸这三种氨基酸与胶体金联接的作用机理各不相同。1、赖氨酸带有较强的正电荷，因而自然吸附带负电荷的金颗粒；2、色氨酸主要通过疏水相互作用与胶体金相联接；3、半胱氨酸通过SH-与金表面以共用电子的形式形成配位键。抗体通过这几种作用力与胶体金颗粒牢固、稳定的、不易分离的结合在一起。在很大程度上，标记成功与否取决于上述三种氨基酸残基在被标记蛋白质上的结合位点。在某种情况下，氨基酸联接于蛋白质的活性部位，从而干扰蛋白质的反应活性。空间位阻的限制，当这几种氨基酸残基定位于抗体的抗原结合部位或抗原的特异抗体结合决定簇部位时，可能出现这种类型的干扰。如果被标记的蛋白质分子未做特定的处理就几乎不可能克服这种干扰。为了在免疫检测中获得较好的灵敏，这三种与标记相关氨基酸的正确结合是非常重要的。就标记抗体来说，这三种氨基酸应定位于Fc区，而对于标记抗原，它们应远离抗原的反应决定簇位置。无锡天纵易骏可大量供应读数仪 欢迎咨询。山西胶体金快速检测读数仪定制

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    胶体金蛋白结合物的质量鉴定（1）胶体金颗粒平均直径的测量：用支持膜的镍网（铜网也可）蘸取金标蛋白试剂，自然干燥后直接在透射电镜下观察。或用醋酸铀复染后观察。计算100个金颗粒的平均直径。（2）胶体金溶液的OD520nm值测定：胶体金颗粒在波长510nm～550nm之间出现*大吸收值峰。用（含1％BSA，％NaN3）将胶体金蛋白试剂作1︰20稀释，OD520＝。一般应用液的OD520应为～。（3）金标记蛋白的特异性与敏感性测定：采用微孔滤膜免疫金银染色法（MF－IGSSA）。将可溶性抗原（或抗体）吸附于载体上（滤纸、硝酸纤维膜、微孔滤膜），用胶体金标记的抗体（或抗原）以直接或间接染色法并经银显影来检测相应的抗原或抗体，对金标记蛋白的特异性和敏感性进行鉴定。 北京胶体金快速定量读数仪在线议价

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