免疫胶体金技术的基本知识1、胶体金的概念氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。2、免疫金标记技术胶体金颗粒表面负电荷与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。胶体金对蛋白质有很强的吸附功能，广西胶体金快速检测读数仪品牌，蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面，无共价键形成，标记后大分子物质活性不发生改变。3，广西胶体金快速检测读数仪品牌、胶体金的示踪原理金颗粒具有高电子密度的特性。金标蛋白在相应的配体处大量聚集时，在显微镜下可见黑褐色颗粒或肉眼可见红色或粉红色斑点。免疫金银染色：利用金颗粒可催化银离子还原成金属银这一原理，广西胶体金快速检测读数仪品牌，通过银颗粒的沉积，在光镜下可见抗原抗体反应的阳性部位呈现银的黑褐色。无锡天纵易骏可大量供应各类公司读数仪 欢迎咨询。广西胶体金快速检测读数仪品牌

蛋白质适用量的选择：胶体金与标记蛋白用量之比的确定：根据待标记蛋白的要求，将胶体金调好pH之后，分装10管，每管1ml.将标记蛋白（以IgG为例）以0.005Mol/LpH9.0硼酸盐缓冲液做系列稀释为5µg/ml～50µg/ml，分别取1ml，加入上列金胶溶液中，混匀。对照管只加1ml稀释液。5min后，在上述各管中加入0.1ml10％NaCl溶液，混匀后静置2h，观察结果。结果观察，对照管（未加蛋白质）和加入蛋白质的量不足以稳定胶体金的各管，均呈现出由红变蓝的聚沉现象；而加入蛋白量达到或超过低稳定量的各管仍保持红色不变。以稳定1ml胶体金溶液红色不变的低蛋白质用量，即为该标记蛋白质的低用量，在实际工作中，可适当增加10％～20％。将待标记的蛋白质储存液作系列稀释后，分别取0.1ml(含蛋白质5～40ug)加到1ml胶体金溶液中，另设一管不加蛋白质的对照管，５分钟后加入0.1ml10％NaCl溶液，混匀后静置２小时，不稳定的金溶胶将发生聚沉，能使胶体金稳定的适合蛋白量再加10％即为标记蛋白量。黑龙江读数仪市场价胶体金技术具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点。

    胶体金的稳定性溶胶的稳定性介于小分子离子溶液和粗分散相之间，其颗粒作布朗运动，不易受重力影响而下沉。然而，溶胶又是不稳定体系，它的胶粒溶剂化作用很弱，总面积较大、因在胶粒相互碰撞时，有自动合并为较大、较重的颗粒倾向。当胶体颗粒直径变大，超出胶体范围而从介质中沉淀出来的现象叫聚沉。影响其稳定性的主要原因有三点。(1)胶粒间的相互吸引力当胶粒相距很近时，这种吸引力可能导致胶体颗粒合并而变大。(2)胶粒及其溶剂化层胶粒及其溶剂化层(溶剂是水时就是水化层)的带电情况。一种溶胶的各个胶粒都带有相同的电荷。同性电荷相斥，双电子层变厚，胶粒带电量愈大，排斥力愈大，愈能阻止胶粒合并聚结，溶胶愈稳定。(3)胶体接口的溶剂膜当二个固体间夹有一厚层液体时，这层液体膜有一个反抗二固体接近的排斥力。两个胶粒要进一步接近，只有克服它们之间的溶剂化膜的斥力才有可能，因此溶剂膜的斥力是使溶胶稳定的原因之一。

胶体金标记蛋白质影响因素：胶体金与蛋白质之间是通过正负电荷之间存在的范徳瓦尔引力相结合的，胶体金颗粒与蛋白质分子之间无共价键联系。胶体金标记蛋白质过程属于物理过程，标记体系的pH值、离子浓度及二者的比例等均可影响标记效果，一般情况下，当胶体金pH值接近或大于蛋白质等电点时，胶体金对蛋白质的吸附力强。反之，当胶体金pH值低于蛋白质等电点时，则会凝集而失去结合能力。如在标记葡萄球菌A蛋白（SPA）时，SPA等电点是pI5.1，胶体金的pH值可选择在pH5.9-6.2。标记单抗时，胶体金的pH值适宜在pH8.2。对于含有多种大分子蛋白的样品，如多价抗体的标记，实际上很难满足体系中各种蛋白分子的等电点的要求。为了取得较好的标记条件，可先将标记蛋白用低于pH9.0的缓冲液透析，胶体金的pH值调在pH9.0进行标记。影响胶体金标记蛋白质是否成功的另一个重要因素是胶体金与标记蛋白质的用量比例。通常蛋白质的用量取决于胶体金的颗粒大小，金颗粒直径越小，金颗粒所具有的总表面积就越大，可吸附蛋白质的量也就越大。读数仪品质可靠，欢迎咨询无锡天纵易骏了解！

快速诊断技术（侧向层析和渗滤测试盒）。对于该应用方向，常用的胶体金颗粒是40nm.在标记IgG时，40nm的胶体金颗粒提供较大的可视性和较小的空间位阻。分子量为160kDa的IgG分子，长度大约为8nm.40-100nm间的胶体金颗粒比较顺利标记到IgG抗体上。比40nm大的颗粒有较大的可视性，但较大胶体金颗粒在1ml溶液时520nm吸光度较小，因此较少在检测线处被捕获。综上所述，同40nm或60nm胶体金标记的抗体相比，较大颗粒的胶体金结合物对1-10ng/ml分析物具有较低的灵敏度。60nm胶体金颗粒非推荐使用，但可以应用于快速诊断分析。其不同于40nm胶体金颗粒，颜色偏浅。高质量的40nm胶体金为樱桃红色，而60nm胶体金为深粉红色。在某种情况下，样品类型可使膜上残留背景底色，这种轻微的颜色差异可以使信号容易识别。比如，含有胆红素的样本将留下的背景底色，相对褐色，粉红色较红色容易被识别。如果用于标记分子的分子量小于160kDa，20nm胶体金颗粒更适合。20nm胶体金颗粒通常用于标记链霉亲和素、A蛋白和抗原，这些被标记蛋白的分子量小于60kda.灵敏度随着快速诊断技术进步使胶体金结合物的灵敏度得到提高。无锡天纵易骏可供应品质读数仪 欢迎咨询。广西胶体金快速检测读数仪品牌

POCT设计体积小、重量轻，便于携带。广西胶体金快速检测读数仪品牌

    标记方法的调试：为了开发、优化单一标记的胶体金结合物，研究人员通常制备小批量的多达60批次的不同胶体金结合物。每批次胶体金结合物在某一关键制备步骤上都与其它不同，各批次都被测试从而确定哪种标记技术的检测分析可能获得较好的反应结果。这类调试应该包括所有可以改善胶体金结合物的灵敏度、交叉反应以及潜在稳定性的技术参数。典型的测试应包含但不应限于抗体工作缓冲液、防腐剂的类型、盐度、表面活性剂含量、胶体金颗粒的尺寸、封闭剂的类型、总蛋白浓度、结合物工作缓冲液以及结合物的浓度。为了确定不同封闭剂的效果，建议考虑以下调试内容：封闭剂的类型（如酪蛋白、BSA、卵清蛋白、人血清白蛋白、PEG、非特异性IgG）；封闭剂的纯度封闭剂的含量；封闭剂对整个测试反应的兼容性。 广西胶体金快速检测读数仪品牌

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